Häufig gestellte Fragen zum Tier/Zell-Gesamt-RNA-Isolierungskit

Die folgende Analyse der Probleme, auf die Sie bei der RNA-Extraktion aus tierischem Gewebe/Zelle stoßen können, wird Ihnen bei Ihren Experimenten helfen.Darüber hinaus haben wir für andere experimentelle oder technische Probleme neben Bedienungsanleitungen und Problemanalysen einen engagierten technischen Support, der Ihnen hilft.Wenn Sie irgendwelche Bedürfnisse haben, kontaktieren Sie uns bitte unter: 028-83360257 oder E-mali: Tech@foregene.com.

RNA wird nicht extrahiert oder die RNA-Ausbeute ist gering

Es gibt oft eine Vielzahl von Faktoren, die die Rückgewinnungseffizienz beeinflussen, wie z. B.: RNA-Gehalt der Gewebeprobe, Betriebsmethode, Elutionsvolumen usw.

1. Während des Betriebs wurde eine Eisbad- oder kryogene (4 °C) Zentrifugation durchgeführt.

Empfehlung: Während des gesamten Prozesses bei Raumtemperatur (15-25 °C) arbeiten, kein Eisbad und bei niedrigen Temperaturen zentrifugieren.

2. Unsachgemäße Probenaufbewahrung oder zu lange Probenlagerzeit.

Empfehlung: Proben bei -80 °C lagern oder in flüssigem Stickstoff einfrieren und wiederholtes Einfrieren/Auftauen vermeiden;Versuchen Sie, frisches Gewebe oder kultivierte Zellen für die RNA-Extraktion zu verwenden.

3. Unzureichende Probenlyse.

Empfehlung: Achten Sie beim Homogenisieren von Gewebe darauf, dass das Gewebe ausreichend homogenisiert ist und die Gewebezellen ausreichend gespalten sind, um die Freisetzung von RNA zu erklären.

4. Der Eluent wird nicht richtig zugegeben.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass RNase-freies ddH2O tropfenweise in die Mitte der Membran der Reinigungssäule gegeben wird.

5. Puffer RL2 oder Puffer RW2 wurde nicht das richtige Volumen an absolutem Ethanol zugesetzt.

Empfehlung: Befolgen Sie die Anweisungen, fügen Sie Puffer RL2 und Puffer RW2 das richtige Volumen absolutes Ethanol hinzu und mischen Sie gut, bevor Sie das Kit verwenden.

6. Die Gewebeprobendosierung ist nicht angemessen.

Empfehlung: Verwenden Sie 10–20 mg Gewebe oder (1–5) × 106 Zellen pro 500 μl Puffer RL1, da übermäßiger Gewebeverbrauch zu einer verringerten RNA-Extraktion führen kann.

7. Falsches Elutionsvolumen oder unvollständige Elution.

Empfehlung: Das Elutionsvolumen der Aufreinigungssäule beträgt 50-200 μl;ist der Elutionseffekt nicht zufriedenstellend, empfiehlt es sich, nach Zugabe von vorgewärmtem RNase-Free ddH2O die Stellzeit bei Raumtemperatur zu verlängern, z. B. um 5-10 min.

8. Die Reinigungssäule weist nach dem Waschen mit Puffer RW2 Ethanolrückstände auf.

Empfehlung: Wenn nach dem Waschen mit Puffer RW2 Ethanolrückstände vorhanden sind, kann die Leerröhrchenzentrifugation für 1 Minute, die Zeit für die Leerröhrchenzentrifugation auf 2 Minuten erhöht oder die Reinigungssäule für 5 Minuten auf Raumtemperatur gestellt werden, um die Rückstände ausreichend zu entfernen Äthanol.

Aufgereinigte RNA wird abgebaut

Die Qualität der gereinigten RNA hängt von Faktoren wie der Aufbewahrung der Probe, RNase-Kontamination und Manipulation usw. ab.

1. Gewebeproben werden nicht rechtzeitig aufbewahrt.

Empfehlung: Wenn Gewebeproben oder Zellen nicht zeitnah nach der Entnahme verwendet werden, sofort bei -80 °C oder flüssigem Stickstoff kryokonservieren.Verwenden Sie zum Extrahieren von RNA nach Möglichkeit eine neu entnommene Gewebe- oder Zellprobe.

2. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen von Gewebeproben.

Empfehlung: Bei der Aufbewahrung von Gewebeproben ist es am besten, sie zur Konservierung in kleine Stücke zu schneiden und bei der Verwendung eines der Stücke zu entfernen, um ein wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Probe und den Abbau von RNA zu vermeiden.

3. RNase eingeführt wird oder während der Operation keine Einweghandschuhe, Masken usw. trägt.

Empfehlung: RNA-Extraktionsexperimente werden am besten in separaten RNA-Manipulationsräumen durchgeführt und der Tisch wird vor dem Experiment abgeräumt.

Tragen Sie während des Experiments Einweghandschuhe und -masken, um den durch die Einführung von RNase verursachten RNA-Abbau zu minimieren.

4. Reagenzien werden während der Verwendung mit RNase kontaminiert.

Empfehlung: Für ähnliche Experimente durch ein neues Animal Total RNA Isolation Kit ersetzen.

5. Die bei der RNA-Manipulation verwendeten Zentrifugenröhrchen, Spitzen usw. sind mit RNase kontaminiert.

Empfehlung: Vergewissern Sie sich, dass die bei der RNA-Extraktion verwendeten Zentrifugenröhrchen, Spitzen, Pipetten usw. alle RNase-frei sind.

Aufgereinigte erhaltene RNA beeinflusst nachgeschaltete Experimente

Durch die Reinigungssäule gereinigte RNA, wenn der Salzionen-Proteingehalt zu groß ist, wirkt sich auf das nachgeschaltete Experiment aus, wie z. B.: reverse Transkription, Northern Blot et al.

1. Die eluierte RNA hat Salzionenreste.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass dem Puffer RW2 das richtige Ethanolvolumen hinzugefügt wurde, und führen Sie 2 Reinigungssäulenwäschen mit der für den Betrieb angegebenen Zentrifugalgeschwindigkeit durch;Wenn Salzionenrückstände vorhanden sind, belassen Sie die Reinigungssäule für 5 Minuten bei Raumtemperatur in Puffer RW2 und führen Sie eine Zentrifugation durch, um die Entfernung von Salzverunreinigungen zu maximieren.

2. Ethanolrest in eluierter RNA.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass nach dem Waschen mit Puffer RW2 die Zentrifugation mit leerem Röhrchen mit der für den Betrieb angegebenen Zentrifugationsgeschwindigkeit durchgeführt wird, erhöhen Sie die Zeit der Zentrifugation mit leerem Röhrchen auf 2 Minuten, wenn noch Ethanolrückstände vorhanden sind, oder lassen Sie sie 5 Minuten lang bei Raumtemperatur min nach der Zentrifugation des leeren Röhrchens, um die Entfernung von Ethanolrückständen zu maximieren.