WIE MAN DIE LEISTUNGSFÄHIGKEIT DER LNCRNA-RÜCKSEITEN-ÜBERTRAGUNG VERBESSERT?

Führung

Lange Nichtkodierung RNS, lncRNA ist eine Nichtkodierung RNS mit größeren als 200 Nukleotiden einer Länge, im Allgemeinen zwischen NT 200-100000. lncRNA reguliert Genexpression an epigenetischem, Übertragung und nach-transcriptional Niveaus und nimmt am X-Chromosom teil, das zum Schweigen bringt, das aufprägende Genom und Chromatinänderung, Übertragungsaktivierung, Übertragungsstörung, Kerntransport, Zellzyklusregelung, Zelldifferenzierungsregelung und Dosisausgleichseffekte (Dosierungsausgleichseffekt) und viele anderen wichtigen vorgeschriebenen Prozesse sind zum Vorkommen, zur Entwicklung und zur Verhinderung von menschlichen Krankheiten eng verwandt und sind z.Z. eine der brenzligen Stellen auf dem Gebiet von Biomedizin.

01 Arten und Eigenschaften von LncRNA

lncRNA wird in viele Arten entsprechend den verschiedenen Quellen seiner Bildung, wie in der Zahl gezeigt oben unterteilt. Hat die folgenden Eigenschaften:

1. lncRNAs sind normalerweise, mit dynamischem Ausdruck und verschiedenen verstärkenden Methoden während der Unterscheidung länger
2. verglichen mit der Kodierung von Genen, hat lncRNA normalerweise ein unteres Ausdruckniveau
3. Die meisten lncRNAs haben offensichtliche zeitliche und räumliche Ausdruckbesonderheit bei Gewebeunterscheidung und -entwicklung
4. Es gibt charakteristische Ausdrücke in den Tumoren und in anderen Krankheiten
5. Die subzellularen Standorte von lncRNA sind verschieden
6. Die Reihenfolge ist in der Erhaltung niedrig, aber die Funktion hat einen bestimmten Grad an Erhaltung, etc.

02 häufig gestellte Fragen über LncRNA-Rückseiten-Übertragung

Wegen des niedrigen Inhalts von lncRNA in den Zellen, lange Länge und hochrangige Struktur, hat solche RNS häufig komplexe Strukturen wie Stammschleifen oder -haarnadeln, und Funktelegrafie-qPCR ist für Probleme der erfolglosen Rückübertragung oder der niedrigen Leistungsfähigkeit anfällig.

03 LncRNA Rückseiten-Übertragungslösung

In der zentralen Regel der Prozess von RNS-Viren unter Verwendung ihrer eigenen Rückseite Transkriptase, zum von DNA unter Verwendung der RNS zu synthetisieren, wie eine Schablone Rückübertragung genannt wird. Der Prozess der Anwendung der RNS-Virusrückseite Transkriptase, um cDNA Schablone zu synthetisieren in vitro wird Rückübertragung genannt. Die Hauptelemente umfassten im Rückübertragungssystem: RNS-Schablone, Rück-Transkriptase, Zündkapseln und andere Komponenten.

Schablone 1.RNA

Der Einfluss der RNS-Schablone auf Rückübertragung wird in seiner Struktur, in Reinheit und in Integrität reflektiert. Das höher die Reinheit und die Integrität der extrahierten RNS, des höher die Leistungsfähigkeit der Rückübertragung und des genauer die folgenden quantitativen Ergebnisse. Die RNS, die durch allgemein verwendete RNS-Extraktionsreagenzien enthält gereinigt wird häufig, Rückstände von Alkohol- und Guanidinsalzen, die einen starken hemmenden Effekt auf die meiste Rückseite Transkriptase haben.

2.Reverse Transkriptase

Rück-Transkriptase hat einen Schlüsseleinfluß im gesamten Rückübertragungssystem. Die passende Temperatur für die Rückseite Transkriptase, das in den meisten Labors verwendet wird, ist im Allgemeinen 42°C. tatsächlich, erfordert die Eröffnung der hochrangigen RNS-Struktur eine höhere Temperatur, und die Anforderungen für die Rückseite Transkriptase sind höher.

3.Primer

Rückübertragungszündkapseln schließen Gen-spezifische Zündkapseln, gelegentliche Zündkapseln und Oligo Papierlösekorotron-Zündkapseln mit ein. Die meisten lncRNAs enthalten nicht PolyAendstücke, und es ist wichtig, die gelegentlichen Zündkapseln mit Oligo Papierlösekorotron richtig zusammenzubringen.

Komponenten 4.Other

Angesichts der Tatsache, dass RNS besonders einfach zu vermindern ist, kann die Einleitung von Komponenten im Rückübertragungssystem herabgesetzt werden, das den Eintritt der RNase effektiv verhindern und den glatten Fortschritt der Rückübertragung sicherstellen kann.

Foregene erreicht von der RNS-Schablone, Rückübertragung zum qPCR eskortieren umfassend Ihre lncRNA Entdeckung

Tiergesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstung (mit gDNA Abbauspalte)

Zellengesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstung (mit gDNA Abbauspalte)

Lnc-Funktelegrafie HeroTM I (mit gDNase) (Supermischgut für Erststrang cDNA Synthese vom lncRNA)

Realzeit-Grün I PCR EasyTM-SYBR

Vorteile der RNS-Extraktion:

Die Ausrüstung setzt die Drittgenerations- RNSfördertechnik, keinen Bedarf, DNAse zu benutzen ein.

11 Minuten von wohler Platte 96, 24, 12 und 6 züchteten Zellen, Hochleistungsfähigkeits-Extraktion der gDNA-freien, hochwertigen Gesamtzellen-RNS von hohem Reinheitsgrad.

Vorteile von lncRNA Rückübertragung:

Ein Rückübertragungssystem besonders entwickelt, damit LncRNA schnell genomische DNA-Verschmutzung entfernt.

Das Rückübertragungssystem hat hohe Wärmebeständigkeit und hat noch gute Rückübertragungsleistung an 50°C.

Schablonen mit hohem GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt und komplexer Sekundärstruktur können mit hoher Leistungsfähigkeit aufgehoben werden.

Vorteile von qPCR:

Polymerase Heißstart Foregene Taq hat höhere Verstärkungs-Leistungsfähigkeit, höhere Verstärkungsempfindlichkeit und höhere Verstärkungsbesonderheit.

Die optimierte wirkliche einfache Mischung PCR macht SYBR-Grün, das ich höhere Entdeckungsempfindlichkeit habe, und seine Fluoreszenzintensität ist 3-5mal, die von den ähnlichen Produkten, die den Bedarf von verschiedenen Arten von quantitativen Experimenten der Fluoreszenz erfüllen können.