RNS-Extraktionsvorbereitung und -vorkehrungen

Sterilisation von Pipettenspitzen und EP-Rohre, etc.

1. Bereiten Sie 0,1% (ein tausendstes) DEPC (in hohem Grade giftige Substanz) mit entionisiertem Wasser vor, verwenden Sie es sorgfältig in einer Dampfhaube, und speichern Sie es an 4°C weg von Licht;

DEPC-Wasser ist das reine Wasser, das mit DEPC behandelt wird und durch hohe Temperatur und Hochdruck entkeimt ist. Geprüft, um von der RNase, von der DNAse und von der Proteinase frei zu sein.

2. Setzen Sie die Pipettenspitze und EP-Rohr in 0,1% DEPC, und garantieren Sie, dass die Pipettenspitze und EP-Rohr mit 0,1% DEP gefüllt werden.

3. Schützen Sie sich vor hellem, lassen Sie Stand, über Nacht (12-24h)

4. Der Kasten, der das Umkippung und EP-Rohr enthält, braucht nicht, in DEPC getränkt zu werden. Nachdem Sie ungefähr das DEPC-Wasser in der Spitze oder IN EP-Rohr entfernt haben, verpacken Sie es oben und wickeln Sie es oben ein.

5. 121 Grad Celsius, 30min

6. 180 Grad Celsius, trocknen einige Stunden lang (mindestens 3 Stunden)

Anmerkung: a., Abnutzungslatexhandschuhe und -masken, wenn DEPC behandelt wird! b oder ohne DEPC-Sterilisation, 130 ℃, Autoklav 90min (Sterilisation der viele Laborhohen temperatur zweimal)

RNS-Extraktionserwägungen

Zwei bedeutende Phänomene des Gewebe RNS-Isolierungsausfalls

RNS-Verminderung und Rückstände von Verunreinigungen in den Geweben, betreffend Verminderung, ließen uns zuerst betrachten, warum RNS von kultivierten Zellen wird nicht leicht vermindert extrahierte. Bestehende RNS-Extraktionsreagenzien alle enthalten Komponenten, die schnell RNase hemmen. Fügen Sie das lysate den kultivierten Zellen, hinzu und mischen Sie es einfach, können alle Zellen mit dem lysate gänzlich gemischt werden, und die Zellen werden vollständig aufgelöst. Nachdem die Zellen aufgelöst sind, hemmen die Wirkstoffe im lysate sofort die intrazelluläre RNase, also bleibt die RNS intakt. Das heißt, weil die kultivierten Zellen leicht und völlig mit dem lysate befragt werden, wird ihre RNS nicht leicht vermindert; andererseits wird die RNS im Gewebe leicht vermindert, weil die Zellen im Gewebe nicht einfach sind, mit dem lysate schnell in Verbindung zu treten. wegen des genügenden Kontaktes. So dort ist annehmen eine Weise, das Gewebe zu eine Einzelzelle zu machen, während inhibierende RNS-Tätigkeit, das Problem der Verminderung vollständig gelöst werden könnte.

Das Mahlen des flüssigen Stickstoffes ist solche Methode das effektivste. Jedoch ist die Prägemethode des flüssigen Stickstoffes sehr unangenehm, besonders wenn die Anzahl von Proben groß ist. Dieses verursachte die nächstbeste Sache: der Homogenisierer. Die Homogenisierermethode betrachtet nicht die Frage von, wie RNasetätigkeit wird, bevor Zellen mit dem lysate befragt gehemmt, aber eher betet werden, dass die Rate der Gewebeunterbrechung schneller als die Rate ist, an der intrazelluläre RNase RN vermindert.

Der Effekt des elektrischen Homogenisierers ist besser, und der Effekt des Glashomogenisierers ist schlecht, aber im allgemeinen, kann die Homogenisierermethode das Verminderungsphänomen nicht verhindern. Deshalb wenn die Extraktion vermindert wird, sollte der ursprüngliche elektrische Homogenisierer für das Reiben mit flüssigem Stickstoff benutzt werden; der ursprüngliche Glashomogenisierer sollte zu einem elektrischen Homogenisierer geändert werden oder mit flüssigem Stickstoff direkt gemahlen werden. Das Problem ist fast durchführbares 100%. erhalten Sie entschlossen.

Das Verunreinigungsrückstandproblem, das folgende Experimente beeinflußt, hat verschiedenere Ursachen als Verminderung, und die Lösungen sind entsprechend unterschiedlich. Als schlußfolgerung wenn es Verminderung oder Restverunreinigungen im Gewebe gibt, müssen die Extraktionsmethode/-reagens für das spezifische experimentelle Material optimiert werden. Sie müssen Ihre kostbaren Proben nicht für Optimierung benutzen: Sie können einige kleine Tiere wie Fische/Huhn vom Markt kaufen, das entsprechende Teil des Materials für RNS-Extraktion und das andere Teil für Proteinextraktion zu nehmen - Schleifen mit Mund, dem Magen und Därme Auszug.

Die Ziel RNS der extrahierten RNS wird für unterschiedliches verfolgen Experimente benutzt, und seine Qualitätsanforderungen sind unterschiedlich

cDNA Bibliotheksbau erfordert RNS-Integrität ohne Rückstände von Enzymreaktionshemmnissen; Nord erfordert höhere RNS-Integrität und senkt Anforderungen für Enzymreaktions-Hemmnisrückstände; RT-PCR erfordert nicht zu hohe RNS-Integrität, aber hemmt Enzymreaktionen. Rückstandanforderungen sind streng. Der Input bestimmt den Ertrag; jedes Mal wenn das Ziel, die höchster Reinheitsgrad RNS zu erhalten ist, kostet es die Leute und das Geld.

Sammlung/Lagerung von Proben

Die Faktoren, die Verminderung beeinflussen, nachdem die Probe dem lebenden body/or die ursprüngliche Wachstumsumwelt verlässt, die endogenen Enzyme in der Probe fangen an, RNS zu vermindern, und die Verminderungsrate hängt mit dem Inhalt von endogenen Enzymen und von Temperatur zusammen. Traditionsgemäß gibt es nur zwei Möglichkeiten, endogene Enzymaktivität vollständig zu hemmen: addieren Sie lysate sofort und homogenisieren Sie gänzlich und schnell; schneiden Sie in Stückchen und im flüssigen Stickstoff sofort einzufrieren. Beide Ansätze erfordern schnelle Operation. Das letztere ist für alle Proben passend, während das ehemalige nur passend für Gewebe mit niedrigem Inhalt von Zellen und von endogenen Enzymen und einfacher zu homogenisieren ist. Speziell, Pflanzengewebe, Leber, Thymusdrüse, Pankreas, Milz, Gehirn, Fett, Muskelgewebe, etc. werden gut mit flüssigem Stickstoff vor Verfahren eingefroren.

Fragmentierung und Homogenisation von Proben

Die Faktoren, die Verminderungs-und Ertrag-Beispielfragmentierung beeinflussen, ist- für gründliche Homogenisation, die für komplette und komplette Freisetzung von RNS ist. Zellen können direkt homogenisiert werden, ohne gebrochen zu sein. Gewebe können homogenisiert werden, erst nach gebrochen sein. Hefe und Bakterien müssen mit entsprechenden Enzymen gebrochen sein, bevor sie homogenisiert werden können. Gewebe mit unterem endogenem Enzymgehalt und einfacherer Homogenisation können im lysate durch einen Homogenisierer auf einmal zerquetscht werden und homogenisiert werden; Pflanzengewebe, Leber, Thymusdrüse, Pankreas, Milz, Gehirn, Fett, Muskelgewebe und andere Proben, sind sie in den endogenen Enzymen auch nicht hoch oder werden nicht leicht homogenisiert, also müssen Gewebeunterbrechung und -homogenisation separat durchgeführt werden. Die zuverlässigste und produktivste Methode der Fragmentierung mahlt mit flüssigem Stickstoff, und die zuverlässigste Methode der Homogenisation ist der Gebrauch eines elektrischen Homogenisierers. Eine spezielle Anmerkung über das Mahlen mit flüssigem Stickstoff: die Probe darf nicht während des gesamten Prägeprozesses aufgetaut werden, da endogene Enzyme wahrscheinlicher sind zu arbeiten, wenn sie eingefroren werden.

Wahl von lysate

Die Bequemlichkeit der Operation und die Faktoren von residuell endogenen Verunreinigungen beeinflussend, können die allgemein verwendeten Zerstörungslösungen die Tätigkeit der RNase fast hemmen. Deshalb ist der springende Punkt des Wählens einer Zerstörungslösung, im Verbindung mit der Reinigungsmethode zu betrachten. Es gibt eine Ausnahme: Proben mit hohem endogenem Enzymgehalt werden empfohlen, um ein lysate zu benutzen, das Phenol enthält, um die Fähigkeit zu erhöhen, endogene Enzyme zu inaktivieren.

Wahl der Reinigungsmethode

Faktoren, die residuell endogene Verunreinigungen beeinflussen, Extraktionsgeschwindigkeit für saubere Proben wie Zellen, zufriedenstellende Ergebnisse können mit fast jeder möglicher Reinigungsmethode erreicht werden zur Hand. Aber für viele anderen Proben, besonders die mit hohen Stufen von Verunreinigungen wie Anlagen, Leber, die Bakterien, etc., eine passende Reinigungsmethode ist zu wählen entscheidend. Die zentrifugale Reinigungsmethode der Spalte hat eine schnelle Extraktionsgeschwindigkeit und kann Verunreinigungen effektiv entfernen, die die folgende enzymatische Reaktion von RNS beeinflussen, aber sie ist teuer (Foregene kann kosteneffektive Ausrüstungen anbieten, weitere Einzelheiten klicken hier); die Anwendung von wirtschaftlichen und klassischen Reinigungsmethoden, wie LiClniederschlag, kann zufriedenstellende Ergebnisse auch erzielen, aber die Operationszeit ist. lang.

„Drei Disziplinen und acht Aufmerksamkeit“ für RNS Extraktion

Disziplin 1: Beenden Sie die Verschmutzung von exogenen Enzymen.

Anmerkung 1: Tragen Sie ausschließlich Masken und Handschuhe.

Anmerkung 2: Die Zentrifugenrohre, die Umkippungsköpfe, die Pipettenstangen, die Elektrophoresebehälter und die experimentellen Bänke, die in das Experiment mit einbezogen werden, sollten gänzlich entledigt werden.

Anmerkung 3: Die Reagenzien/die Lösungen, die in das Experiment, besonders Wasser mit einbezogen werden, müssen RNase-frei sein.

Disziplin 2: Blockieren Sie die Tätigkeit von endogenen Enzymen

Anmerkung 4: Wählen Sie eine passende Homogenisationsmethode.

Anmerkung 5: Wählen Sie ein passendes lysate.

Anmerkung 6: Steuern Sie die beginnende Menge der Probe.

Disziplin 3: Erklären Sie Ihren Extraktionszweck

Anmerkung 7: Wenn jedes mögliches lysate System der maximalen beginnenden Menge sich nähert, der Probe, fällt die Extraktionserfolgsquote scharf.

Anmerkung 8: Das einzige wirtschaftliche Kriterium für erfolgreiche RNS-Extraktion ist ein Erfolg in den folgenden Experimenten, nicht Ertrag.

Top 10 Quellen der RNase-Verschmutzung

1. Finger sind die erste Quelle von exogenen Enzymen, also müssen Handschuhe häufig getragen werden und ersetzt werden. Darüber hinaus müssen Masken auch getragen werden, weil die Atmung auch eine wichtige Quelle von Enzymen ist. Ein zusätzlicher Nutzen des Tragens einer Handschuhmaske ist, den Experimentator zu schützen.

2. Pipettenspitzen, Zentrifugenrohre, pipettiert – RNase kann nicht durch Sterilisation allein inaktiviert werden, also sollten Pipettenspitzen und Zentrifugenrohre mit DEPC behandelt werden, selbst wenn sie markiert werden, wie DEPC behandelte. Es ist am besten, eine Pipette zu benutzen für einen speziellen Zweck, abwischt sie mit einem 75% Alkoholwattebausch vor Gebrauch, besonders die Stange; darüber hinaus sicher sein, einen Hauptentferner nicht zu benutzen.

3. Das Wasser/der Puffer müssen von der RNaseverschmutzung frei sein.

4. Mindestens sollte die Testtabelle mit 75% Alkoholwattebäuschen sauber abgewischt werden.

• Endogene RNase, die alle Gewebe endogene Enzyme, so Tiefkühlverfahren von den Geweben mit flüssigem Stickstoff enthalten, ist die beste Weise, Verminderung zu verringern. Der Speicher des flüssigen Stickstoffes/die reibende Methode ist tatsächlich ungünstig, aber es ist die einzige Weise für Gewebe mit hohen Stufen von endogenen Enzymen.

6. RNS probiert RNS-Extraktionsprodukte enthält möglicherweise Spuren der RNaseverschmutzung.

7. Plasmidextraktion Plasmidextraktion benutzt häufig RNase, um RNS zu vermindern, und die Restrnase sollte mit Proteinase K verdaut werden und durch PCI extrahiert werden.

8. RNS-Speicher, selbst wenn er bei der niedrigen Temperatur gespeichert wird, Spurnmengen der RNase verursacht RNS-Verminderung. Die beste Lösung für langfristige Bewahrung von RNS ist eine Salz-/Alkoholsuspendierung, weil Alkohol alle enzymatische Tätigkeit bei niedrigen Temperaturen hemmt.

9. Wenn Kationen (Ca, Magnesium) diese Ionen enthalten, veranlaßt die Heizung an 80C für 5 Minuten RNS zerspaltet zu werden, also, wenn RNS erhitzt werden muss, muss die Bewahrungslösung einen Chelatbildner (1mM Natriumcitrat, pH 6,4) enthalten.

10. Die Enzyme, die in den folgenden Experimenten benutzt werden, werden durch RNase verseucht möglicherweise.

10 Spitzen für RNS Extraktion

1: Schnell RNasetätigkeit verhindern. Proben werden schnell nach Sammlung eingefroren, und RNase wird durch schnelle Operation während der Zerstörung inaktiviert.

2: Wählen Sie eine passende Extraktionsmethode für Gewebe mit hohem Ribozymeinhalt, und Fettgewebe ist am besten, die Methode anzuwenden, die Phenol enthält.

3: Vorhersagenqualität erfordert Nord, erfordert cDNA Bibliotheksbau hohe Integrität, und RT-PCR und RPA (Ribonucleaseschutzprobe) erfordern nicht hohe Integrität. RT-PCR erfordert hohen Reinheitsgrad (Enzyminhibitorrückstände).

4: Gründliche Homogenisation ist der Schlüssel zum Verbessern des Ertrags und zur Verringerung von Verminderung.

5: Überprüfen Sie die Integrität der RNS-Elektrophoreseentdeckung, 28S: 18S = 2: 1 ist ein komplettes Zeichen, 1: 1 ist auch für die meisten Experimente annehmbar.

6: Abbau von DNA für RT-PCR, Reihenanalyse ist es am besten, DNAse I zu benutzen, um DNA zu entfernen.

7: Verringern Sie die Verschmutzung von exogenen Enzymen - Enzyme können nicht aus der Außenseite importiert werden.

8: Wenn man Nukleinsäure der Niedrigkonzentration konzentriert, sollte ein Mitniederschlagreagens addiert werden. Aber das Mitfällungsmittel verhindern, das Enzyme und DNA-Verschmutzung enthält.

9: Lösen Sie gänzlich die RNS gegebenenfalls, Hitze an 65C für 5 Minuten auf.

passende Speichermethode

Es kann an – 20C für kurze Zeit und an – 80C für eine lange Zeit gespeichert werden. Der erste Schritt, wenn er RNS-Erträge verbessert, ist, festzustellen, dass der RNS-Gehalt von verschiedenen Proben sich groß unterscheidet. Hoher Überfluss (2-4ug/mg) wie Leber, Pankreas, Herz, mittlerer Überfluss (0.05-2ug/mg) wie Gehirn, Embryo, Niere, Lunge, Thymusdrüse, Eierstock, niedriger Überfluss (<0>

1: Lösen Sie Zellen auf, um RN freizugeben – wenn RNS nicht freigegeben wird, wird der Ertrag verringert. Die elektrischen Homogenisationsarbeiten, die als andere Homogenisationsmethoden besser sind, aber müssen möglicherweise auch mit anderen Methoden kombiniert werden, wie flüssigem stampfendem Stickstoff, enzymatische Verdauung (Lysozym/Lyticase)

2: Optimierung der Extraktionsmethode. Die größten Probleme mit Phenol-ansässigen Methoden sind unvollständige Schichtung und teilweiser RNS-Verlust (das schwimmende kann nicht vollständig entfernt werden). Unvollständige Schichtung liegt am hohen Nukleinsäure- und Proteingehalt, der gelöst werden kann, indem man die Menge von lysate verwendet worden erhöht oder die Menge der Probe verringert. Ein Schritt der Chloroformextraktion wurde dem Fettgewebe hinzugefügt. RNS-Verlust kann durch das zurück-Pumpen oder durch das Entfernen der organischen Schicht verringert werden, die von der Zentrifugierung gefolgt wird. Das größte Problem mit Zentrifugierung-ansässigen Methoden der Spalte ist überschüssige Probe.

Klassische Extraktions-Spitzen

1. Phenolreinigung: Fügen Sie ein gleiches Volumen des 1:1phenols/-chloroforms und -mischung kräftig für 1-2 Minuten hinzu. Zentrifuge an der hohen Geschwindigkeit für 2 Minuten. Entfernen Sie sorgfältig das schwimmende (80-90%). Gelangen Sie nie an die mittlere Schicht. Ein gleiches Volumen der Reaktionslösung kann Phenol/Chloroform und dem schwimmenden hinzugefügt werden entfernt worden. Die zwei supernatants können zusammen gemischt werden, damit Nukleinsäureniederschlag den Ertrag verbessert. Seien Sie nicht, beim Mischen, und versuchen Sie nicht, das ganzes schwimmende zu entfernen zu leicht.

2. Reinigung mit Äthanol 70-80%: Während der Reinigung muss die Nukleinsäure verschoben werden, um zu garantieren, dass das Restsalz weg gewaschen wird. Gleichzeitig sofort nach dem Gießen weg vom Äthanol, entfernen Zentrifuge an der hohen Geschwindigkeit für einige Sekunden und dann das Restäthanol mit einer Pipette. Lösen Sie auf sich, nach für 5-10 Minuten bei Zimmertemperatur stehen.

11. Extraktion von speziellen Organisationen

1. Faserartiges Gewebe: Der Schlüssel zur RNS-Extraktion vom faserartigen Gewebe wie Herzen/Skelettmuskel ist, das Gewebe vollständig zu stören. Diese Gewebe haben niedrige Zelldichte, also ist- die Menge von RNS pro Stückgewicht des Gewebes niedrig, und zu verwenden ist am besten, als viel beginnende Menge, wie möglich. Seien Sie sicher, das Gewebe unter einfrierenden Bedingungen gänzlich zu reiben.

2. Gewebe mit proteinreichem/Fettgehalt: Gehirn/Pflanzenfettinhalt ist hoch. Nach PCI-Extraktion enthält das schwimmende weiße Floccules. Das schwimmende muss mit Chloroform extrahiert werden.

3. Gewebe mit hohem Nukleinsäure-/Ribozymegehalt: die Milz/die Thymusdrüse hat hohen Nukleinsäure- und Ribozymegehalt. Reibendes Gewebe unter den einfrierenden Bedingungen, die von der schnellen Homogenisation gefolgt werden, kann ribozymes effektiv inaktivieren. Jedoch wenn das lysate (wegen des hohen Nukleinsäuregehalts) zu zähflüssig ist, ist die PCI-Extraktion nicht in der Lage, effektiv zu schichten; das Addieren von mehr lysate kann diese Frage lösen. Mehrfache PCI-Extraktionen können residuelldna entfernen. Wenn Formen eines weiße Niederschlags, sofort nach dem Addieren des Alkohols, es, DNA-Verschmutzung anzeigt. Wiedergewinnung mit säurehaltiger PCI, nachdem Auflösung DNA-Verschmutzung entfernen kann.

4. Pflanzengewebe: Pflanzengewebe ist komplexer als tierisches Gewebe. Im Allgemeinen werden Anlagen unter Zuständen des flüssigen Stickstoffes gerieben, so RNS-Verminderung durch endogene Enzyme ist selten. Wenn das Verminderungsproblem nicht gelöst wird, wird es fast zweifellos durch die Verunreinigungen verursacht, die in der Probe enthalten werden. Die Verunreinigungen enthielten in vielen Anlagen führen zu Rückstände, und der Grund für Rückstände ist häufig, weil diese Verunreinigungen etwas Ähnlichkeiten mit RNS haben: Sie führen herbei und ich führe herbei, und Sie adsorbieren und ich adsorbiere. Diese Eigenschaften bestimmen, dass sie sehr starke Enzyminhibitoren sind.

Zur Zeit können Handels-RNS-Extraktionsreagenzien fast allen tierischen Geweben mit kleinen Anpassungen angepasst werden, aber es gibt wenige Handels-RNS-Extraktionsreagenzien, die für die meisten Pflanzengewebe passend sein können. Glücklicherweise kann Foregene spezielle Anlagen-RNS-Extraktionsausrüstungen zur Verfügung stellen, wir haben Anlagengesamt-RNS Isolierungsausrüstung, Anlagengesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstung Plus. Das letztere ist besonders für Anlagen mit hohem Polysaccharid- und Polyphenolgehalt entworfen. Für RNS-Extraktion ist- Feedback von den Laborbenutzern besonders gut.

12. Der Effekt der Probe die gefrorene Probe einfrierend und auftauend ist möglicherweise größer, und er muss geschnitten werden, bevor er für RNS-Extraktion verwendet wird. Proben neigen, (vielleicht teilweise) während des Ausschnitts zu schmelzen. Gefrorene Proben müssen möglicherweise vor RNS-Extraktion gewogen werden, und das Auftauen tritt bestimmt während dieses Prozesses auf. Manchmal tritt das Auftauen der Probe auch während des Prägeprozesses des flüssigen Stickstoffes auf; oder die gefrorene Probe wird direkt dem lysate ohne den flüssigen mahlenden Stickstoff hinzugefügt, und das Auftauen tritt bestimmt vor der kompletten Homogenisation auf. Experimente haben gezeigt, dass gefrorenes Gewebe für RNS-Verminderung während des Auftauens als frisches Gewebe anfälliger ist. Der wahrscheinliche Grund: Der Frieren-Tauenprozeß stört Strukturen innerhalb der Zelle und macht ihn einfacher, damit endogene Enzyme in direkten Kontakt mit der RNS kommen.

13. Urteil der RNS-Qualität normalerweise, Elektrophorese wird verwendet, um die Integrität von RNS zu beurteilen, und A260/A280 wird verwendet, um die Reinheit von RNS zu beurteilen. In der Theorie hat intakte RNS ein Verhältnis von 28S: 18S = 2.7:1 und die meisten Daten heben das Verhältnis von 28S hervor: 18S = 2: 1. Die Tatsache ist, dass fast keine der RNS, die von den Proben anders als Zellen extrahiert wird, in einem 2:1verhältnis ist (dieses wurde unter Verwendung des Agilent Bioanalyzer erreicht).

Die Elektrophoreseergebnisse der RNS werden durch viele Faktoren, einschließlich Sekundärstruktur, Elektrophoresebedingungen, Beispiellast, Sättigungsgrad durch EB, etc. beeinflußt. Verwenden Sie gebürtige Elektrophorese, um RNS und Gebrauch DNA-Marker als Steuerung zu ermitteln. Wenn die 28S an 2kb und am 18S an 0.9kb klar und 28S sind: 18S > 1, die Integrität kann die Bedingungen der meisten folgenden Experimente erfüllen.

A260/A280 ist ein Indikator, der viel Verwirrung verursacht hat. Zuerst ist es notwendig, die ursprüngliche Bedeutung dieses Indikators für Nukleinsäuren zu erklären: reine RNS, seine A260/280 = ungefähr 2,0. Reine RNS ist der becauses und A260/A280 = 2 ist der ‚Effekt‘. Jetzt verwendet jeder A260/A280 als because und denkt das „wenn A260/A280 = 2, dann ist RNS“ rein, die natürlich zu Verwirrung führt.

Wenn Sie interessiert sind, können Sie ein kleines Reagens addieren, das in der Extraktion, wie Phenol, Guanidinisothiozyanat, KLAMMER, etc., zu Ihrer RNS-Probe häufig benutzt ist und dann das Verhältnis A260/A280 misst. Die Wirklichkeit ist, dass viele der Reagenzien, die für RNS-Extraktion benutzt werden, sowie viele Verunreinigungen in der Probe, um A260 und A280 absorbieren und A260/A280 beeinflussen.

Die lehrreichste Annäherung ist zur Zeit, RNS-Proben in der 200-300 Nanometer Strecke zu scannen. Die Kurve der reinen RNS hat die folgenden Eigenschaften: die Kurve ist, A230 glatt und A260 sind zwei Wendepunkte, A300 ist nah zu 0, zu A260/A280 = herum 2,0 und zu A260/A230 = herum 2,0. Wenn Scan-Daten nicht verfügbar sind, muss das Verhältnis A260/A230 entschlossen auch sein, da dieses Verhältnis für Übertrag aller Verunreinigungen empfindlicher ist, die die enzymatische Reaktion beeinflussen. Berücksichtigen Sie die lineare Strecke des Gerätes (0.1-0.5 für A260).

Es gibt zwei andere nützliche Phänomene: das Verhältnis ist ungefähr 0,3 niedriger, wenn A260/A280 im Wasser gemessen wird; während das Verhältnis in 10 Millimeter-EDTA maß, ist ungefähr 0,2 höher als das, das in 1 Millimeter-EDTA gemessen wird.