RT-QPCR EasyTM Taqman eine Realzeit-RT-PCR Vorlagenmischung des Schritt-

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman

Für Realzeit-PCR unter Verwendung des cDNA, reinigte DNA

Produkteinführung

Verwirklichen Ein-RT-PCR einfache Reihenprodukte Foregene, dass die integrierte Reaktion von der RNS zu doppelsträngiger DNA d.h. Übertragung aufzuheben und PCR-Verstärkung im gleichen Reaktionszentrifugenrohr und im gleichen Reaktionssystem abgeschlossen werden, so die experimentellen vereinfachten Schritte, der experimentelle Plan optimierten und die experimentelle Leistungsfähigkeit verbesserte.

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman unter Verwendung Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, das optimierte Taqman-qPCR System kann Realzeitquantitative Entdeckung funktelegraphie-qPCR von Spur RNS-Schablonen schnell und speziell durchführen.

Transport und Lagerbedingungen

• Beförderungsbedingungen: Der ganze Prozess wird in einen niedrigtemperatureiskasten transportiert, um zu garantieren, dass die Ausrüstung in einem Zustand von ist <4>
• Lagerbedingungen: Die Ausrüstung wird an -20℃ gespeichert. Speichern Sie das Produkt in einem Kühlschrank der konstanten Temperatur an -20℃ sofort nach dem Empfang. Wenn die Lagerbedingungen angebracht sind, vermindert das Produkt keine Leistung während des 1-jährigen Gültigkeitszeitraums.

Ausrüstungsteilinformationen

• 2× Mischung-Taqman Funktelegrafie-qPCR EasyTM: Foregene-Rückseite Transkriptase, RNase-Hemmnis, Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, optimiertes Verhältnis von dNTPs, Mg2+, Stabilisator, Vergrößerer und Optimierer.
• ROX-Bezugsfärbung: Im Allgemeinen verwendet auf Realzeit-thermischen cyclers PCR von Firmen wie ABI, Stratagene, etc., um die Meinungsverschiedenheit unter PCR-Rohren beizulegen verursacht durch PCR-Beispielladefehler. Die Konzentration der ROX-Bezugsfärbung, die durch verschiedene Instrumente erfordert wird, ist unterschiedlich, und der Benutzer kann sie entsprechend der empfohlenen Konzentration des Instrumentes hinzufügen.

Vorkehrungen:

u-Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

u die Reagenzien in der Ausrüstung sollte vor Licht geschützt werden und an -20°C. gespeichert werden.

u wird es empfohlen, um die frische Beispielextraktion oder Schablone RNS zu benutzen, die an -80°C gespeichert werden (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

u, zwecks RNaseverschmutzung zu vermeiden, führen bitte das Experiment im RNase-freien Raum durch; die Pipettenspitzen und PCR-Rohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und tragen Sie Wegwerfhandschuhe und Masken.

u diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente verwendet werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

u vor Gebrauch, setzte 2× Mischung-Taqman Funktelegrafie-qPCR EasyTM auf Eis vollständig zur Schmelze, zum leichten Schlag und zur Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung zu verbessern und PCR-Verstärkung zu erhöhen.

Schablone RNS-Konzentration

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman: (1 Gesamt-RNS ng-pg-100)/20 μl System.

Operationsführer

: Vorbereitung von Materialien und von Reagenzien

• Bereiten Sie die vorbereitete RNS-Schablone (es wird empfohlen, um Foregene-Gesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstungs-Reihenausrüstungen zu benutzen, um RNS zu extrahieren und zu reinigen), spezifische Zündkapseln (μM 10) und bezogene Verbrauchsmaterialien und Instrumente vor.

Anmerkung: Stellen Sie bitte die Integrität von RNS sicher und versuchen Sie, die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird.

• Gesetzte 2× Mischung-Taqman Funktelegrafie-qPCR EasyTM, RNase-freie ddH2O- und 20×-ROX Bezugsfärbung (gegebenenfalls) auf dem Eis, zum sie natürlich schmelzen und die Rohrwand schlagen zu lassen, um bis Gebrauch zu mischen.

B: Vorbereitung des Systems Funktelegrafie-qPCR

2× Mischung-Taqman Funktelegrafie-qPCR EasyTM ist bequem und schnell zu verwenden und vermeidet Verschmutzung während der Operation und experimenteller Fehler, die in größtem Maße durch mehrfache Vorbereitungen des Reaktionssystems verursacht werden. Bei der Anwendung, nur addieren Hälfte Volumen des Reaktionssystems (zum Beispiel, wenn das Reaktionssystem μl 20 ist, nehmen Sie 10 μl 2× Mischungs-Taqmanlösung Funktelegrafie-qPCR EasyTM), passende Menge RNS-Schablone und spezifische Zündkapseln und addieren RNase-freies ddH2O, um das Volumen zu bilden. Die spezifische Systemvorbereitung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR kann sich beziehen, 1 unten zu verlegen.

Tabelle 1: Vorbereitung des Systems Funktelegrafie-qPCR

Anmerkung: Vorwärtszündkapsel und Rückzündkapsel sind spezifische Zündkapseln für das Zielgen. Das qPCR System kann entsprechend experimentellem Bedarf und PCR-Modell justiert werden. Für die abschließende Konzentration der meisten Zündkapseln, empfehlen wir 400nM. Justieren Sie bitte die Dosierung der spezifischen Zündkapsel und der Sonde entsprechend der vorbereiteten Konzentration entsprechend unserer empfohlenen abschließenden Konzentration. Für qPCR mit System 50μl, beziehen Sie bitte sich das auf System 20μl, um die Menge von Reagenzien proportional zu justieren.

1*: Wählen Sie die passende abschließende Konzentration der ROX-Bezugsfärbung entsprechend verschiedenen quantitativen PCR-Instrumenten. Die optimale Konzentration der ROX-Bezugsfärbung für allgemeine quantitative PCR-Maschinen wird in der folgenden Tabelle gezeigt:

C: Systemeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR

• Nachdem leicht das System Funktelegrafie-qPCR mit Bezug auf die oben genannte Tabelle, Mischung vorbereitet worden ist (Sie können eine Pipettenspitze zur Pipette leicht verwenden; Sie können auf einem vortexer und einer Zentrifuge, zum der Flüssigkeit zu sammeln, die für die spätere Verwendung auf die Rohrwand oder die Rohrkappe zerstreut wird, und einem Platz auf Eiskasten auch kurz mischen).
• Beziehen Sie sich die auf Programmeinstellungen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (die Tabelle 2), zum der Temperatur und der Zeit der Reaktion einzustellen.

Anmerkung: Um die Tätigkeit von 2× Mischung-Taqman Funktelegrafie-qPCR sicherzustellen EasyTM und seine Verstärkungs-Leistungsfähigkeit zu verbessern, ist es am besten das System der Reaktion vorzubereiten Funktelegrafie-qPCR nachdem man das PCR-Instrumentprogramm gegründet hat, damit das Reaktionsprogramm eingeführt werden kann sofort nachdem die Systemvorbereitung abgeschlossen wird.

• Um den besten qPCR Effekt zu erhalten, kann Steigung PCR verwendet werden um die Reaktionsbedingungen für verschiedene Schablonen und verschiedene Zündkapseln zu optimieren.

Anmerkung: Die ErweiterungsTemperaturspanne Foregene Hotstar Taq DNA-Polymerase stellte in dieser Ausrüstung ist zur Verfügung: 60-72℃ und die beste Erweiterungstemperatur ist 72℃.

Das Folgen ist ein Beispiel von Zuständen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR. Es wird empfohlen, um eine zweistufige Methode für PCR-Reaktion anzuwenden. Wenn die Schablonenkonzentration zu niedrig ist, unspezifische Verstärkung zu verursachen, führt niedriger Zündkapsel TM-Wert zu niedrige Verstärkungs-Leistungsfähigkeit, oder schlechte Verstärkungskurvenwiederholbarkeit, etc., wird es empfohlen, um die dreistufige Methode für PCR-Reaktion zu versuchen. Siehe Tabelle 2-1 (zweistufige Methode) und Tabelle 2-2 (dreistufige Methode) für die Einstellung von Zuständen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR.

Tabelle 2-1: Programmeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (zweistufige Methode)

Tabelle 2-2: Programmeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (dreistufige Methode)

1*: Rückübertragungszeit kann entsprechend experimentellem Bedarf justiert werden. Allgemeine endogene Gene wie Βactin benötigen nur 10 Minuten; um spezifische ausgedrückte Gene zu ermitteln, kann Rückübertragungszeit passend ausgedehnt sein wie gebraucht.

2*: Stellen Sie einen spezifischen Zeitpunkt entsprechend der Länge des verstärkten Zielfragments ein. Die Verstärkungsgeschwindigkeit von Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase ist 2kb/min

Anmerkung: Pcr-Reaktionszustände schwanken abhängig von den baulichen Zuständen der Schablone, der Zündkapseln, des etc. Für RNS-Schablonen mit komplexen Sekundärstrukturen, wird es empfohlen, um 42℃ für den ersten Schritt der Rückübertragung zu verwenden. Im Einzelgeschäft ist es notwendig, die optimalen Reaktionszustände entsprechend den besonderen Bedingungen wie der Größe des Zielfragments zu entwerfen, die Basensequenz des verstärkten Fragments und der GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt und die Länge der Zündkapsel, einschließlich Vergütungstemperatur, Erweiterungszeit, etc.

Arbeitsablauf: