RT-PCR EasyTM II zweistufiges Cat.No.RT - 02021/02022 zweistufige Funktelegrafie PCR-Vorlagenmischung PCR-Ausrüstungen

RT-PCR EasyTM II (zweistufiges) Cat.No.RT - 02021/02022 zweistufige RT-PCR Vorlagenmischung PCR-Ausrüstungen

RT-PCR EasyTM II (zweistufig)

Cat.No.RT - 02021/02022

Zweistufige RT-PCR Vorlagenmischung

RT-PCR EasyTM II (zweistufig)

Cat.No.RT - 02021/02022

Zweistufige RT-PCR Vorlagenmischung

Für nur Forschungsgebrauch

Speicher an -20℃

Produkteinführung

RT-PCR EasyTM II (zweistufig) enthält alle Reagenzien für zweistufiges RT-PCR und kombiniert Funktelegrafie-Reaktion und PCR-Reaktion in der gleichen Ausrüstung und stellt optimierte Funktelegrafie-Mischung und PCR-Mischung zur Verfügung. Die einzigartige Funktelegrafie-Mischung kann hochwertiges Erststrang cDNA leicht und leistungsfähig synthetisieren. 2× Mischungs-Plus PCR EasyTM hat Hochleistungsfähigkeit und spezifische Verstärkung. Die organische Kombination der zwei macht die Entdeckung vom Zielgen empfindlicher.

Eigenschaften

Quantitative Realzeitanalyse von RNS kann schnell und genau durchgeführt werden.

Die Ausrüstung benutzt eine einzigartige Foregene-Rückseitenübertragungsreagens und Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, die mit einem einzigartigen Reaktionssystem kombiniert wird, um die Verstärkungs-Leistungsfähigkeit und die Besonderheit der Reaktion effektiv zu verbessern.

Das optimierte Reaktionssystem macht die Reaktion haben höhere Entdeckungsempfindlichkeit, stärkere Wärmebeständigkeit und bessere Toleranz.

Kit Contents

Transport und Lagerbedingungen

1. Beförderungsbedingungen

Der ganze Prozess des niedrigtemperatureiskastentransportes, garantieren, dass die Ausrüstung in einem Zustand von ist <4>

2. Lagerbedingungen

Gespeichert an -20°C. speichern Sie das Produkt in einem Kühlschrank der konstanten Temperatur an -20°C sofort nach dem Empfang. Wenn die Lagerbedingungen angebracht sind, vermindert das Produkt keine Leistung während des 1-jährigen Gültigkeitszeitraums.

Ausrüstungsteilinformationen

2× Mischung Funktelegrafie EasyTM: Foregene-Rückseite Transkriptase, RNase-Hemmnis, dNTPs, Reaktionspuffer, Optimierer und Stabilisator, etc.

2× Mischungs-Plus PCR EasyTM: Foregene Taq DNA-Polymerase, dNTPs, Mg2+, Reaktionspuffer, Optimierer und Stabilisator.

Vorkehrungen: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

Für Schablonen wird es empfohlen, um die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird oder an -80℃ gespeichert ist (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, sollte die Experimentarbeit im RNase-freien Raum durchgeführt werden; die Pipettenspitzen und DIE PCR-Zentrifugenrohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und Wegwerfhandschuhe und Masken sollten getragen werden.

Diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente benutzt werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

Vor Gebrauch gesetzte Mischung 2×RT EasyTM und Mischungs-Plus 2×PCR EasyTM auf Eis vollständig zur Schmelze, zum leichten Schlag und zur Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung zu verbessern und Besonderheit von PCR-Verstärkung zu verbessern.

Vorkehrungen: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

- Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

- Für Schablonen wird es empfohlen, um die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird oder an -80℃ gespeichert ist (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

- Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, sollte die Experimentarbeit im RNase-freien Raum durchgeführt werden; die Pipettenspitzen und DIE PCR-Zentrifugenrohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und Wegwerfhandschuhe und Masken sollten getragen werden.

- Diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente benutzt werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

- Vor Gebrauch gesetzte Mischung 2×RT EasyTM und Mischungs-Plus 2×PCR EasyTM auf Eis vollständig zur Schmelze, zum leichten Schlag und zur Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung zu verbessern und Besonderheit von PCR-Verstärkung zu verbessern.

Schablone RNS-Konzentration

RT-PCR EasyTM II (zweistufig): (Gesamt-0.1pg-5μg RNSsystem)/20μl

Operationsführer

A-1: Vorbereitung von Materialien und von Reagenzien

1. Bereiten Sie die vorbereitete RNS-Schablone (es wird empfohlen, um Foregene-Gesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstungs-Reihenausrüstungen zu benutzen, um RNS zu extrahieren und zu reinigen), spezifische Zündkapseln (10μM) und in Verbindung stehende Verbrauchsmaterialien und Instrumente vor.

Anmerkung: Stellen Sie bitte die Integrität von RNS sicher und versuchen Sie, die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird.

2. Gesetzte Mischung 2×RT EasyTM und RNase-freie ddH2O auf einem Eisbad, zum es natürlich schmelzen zu lassen und schlagen die Rohrwand, um gut für die spätere Verwendung zu mischen.

A-2: Funktelegrafie-Systemvorbereitung

2× Mischung Funktelegrafie EasyTM ist bequem und schnell zu verwenden und vermeidet Verschmutzung während der Operation und experimenteller Fehler, die in größtem Maße durch mehrfache Vorbereitungen des Reaktionssystems verursacht werden. Bei der Anwendung, einfach nehmen Sie Hälfte Volumen des Reaktionssystems (zum Beispiel, wenn das Reaktionssystem 20μl ist, Nehmen 10μl 2×RT EasyTM Mischungslösung), addieren Sie RNS-Schablone und Rückübertragungszündkapseln, und addieren Sie RNase-freies ddH2O, um das Volumen zu 20μl zu bilden. Die spezifische Funktelegrafie-Reaktionssystemvorbereitung kann sich beziehen, 1 unten zu verlegen.

Form 1: Funktelegrafie-Systemvorbereitung

A-3: Funktelegrafie-Reaktionsprogrammeinstellung

1. Nachdem leicht das Funktelegrafie-System mit Bezug auf die oben genannte Tabelle, Mischung vorbereitet worden ist (Sie können eine Pipettenspitze verwenden, um leicht durchzubrennen; Sie können es auf dem vortexer auch mischen und es zentrifugieren, um die Flüssigkeit zu sammeln, die auf die Rohrwand oder die Rohrkappe zerstreut wird und legen sie in gebrauchsfertiges auf Eiskasten).

2. Beziehen Sie sich die auf Funktelegrafie-Reaktionsprogrammeinstellungen (die Tabelle 2), zum der Reaktionstemperatur, der Zeit, des etc. einzustellen.

Anmerkung: Um die Tätigkeit der Mischung sicherzustellen und seine Verstärkungs-Leistungsfähigkeit zu verbessern, ist es am besten das Funktelegrafie-Reaktionssystem nach dem Metallbad vorzubereiten erreicht die gesetzte Reaktionstemperatur (Rückübertragungstemperatur 42℃ oder 50℃), damit das System sofort nach der Fertigstellung der Systemvorbereitung vorbereitet werden kann. Tragen Sie das Reaktionsprogramm ein. Die Funktelegrafie-Reaktion kann an einer PCR-Maschine auch durchgeführt werden.

Form 2: Funktelegrafie-Reaktionsprogrammeinstellung

Anmerkung: Wenn man gelegentliche Zündkapsel verwendet, sollte die Reaktion an 25℃ für 10min vor dem ersten Schritt der Reaktion vorgeheizt werden. Das oben genannte Verfahren ist als nur Referenz. Die tatsächlichen Reaktionszustände schwanken abhängig von den baulichen Zuständen der Schablone, der Zündkapseln, des etc. Für RNS-Schablonen mit komplexen Sekundärergebnissen, wird die erste Reaktionstemperatur empfohlen, um 50℃ zu sein.

1. Das Reaktionsprodukt kann in den folgenden Tests direkt benutzt werden, oder an -20°C für bis zu eine Woche gespeichert werden. Für Langzeitlagerung wird es empfohlen, um das wiederholte Einfrieren und das Auftauen an -80°C. zu vermeiden.

B: Pcr-Identifizierungsreaktion

B-1: Pcr-Reaktionssystemvorbereitung

Benutzen Sie das cDNA synthetisierte in Schritt A als Schablone und durchführt die PCR-Reaktion mit dem Mischungs-Plus 2×PCR EasyTM, das in der Ausrüstung bereitgestellt wird. Mischungs-Plus des Platz-2×PCR EasyTM, cDNA und RNase-freies ddH2O auf einem Eisbad, zum es natürlich schmelzen und die Rohrwand schlagen zu lassen, um bis Gebrauch zu mischen. Für die spezifische PCR-Systemvorbereitung beziehen Sie sich auf Tabelle 3 unten.

Form 3: Pcr-Reaktionssystem-Vorbereitung 反应体系配制

1*: Normalerweise ist die abschließende Konzentration der Zündkapsel 0.2-0.25μM, zum von besseren Ergebnissen zu erhalten. Wenn die Reaktionsleistung arm ist, kann die Zündkapselkonzentration innerhalb des Bereiches 0.1-0.5μM justiert werden.

B-2: Pcr-Reaktionszustandseinstellung

1. Nachdem leicht das PCR-System mit Bezug auf die oben genannte Tabelle, Mischung vorbereitet worden ist (Sie können eine Pipettenspitze verwenden, um leicht durchzubrennen; Sie können es auf dem vortexer auch mischen und es zentrifugieren, um die Flüssigkeit zu sammeln, die auf die Rohrwand oder die Rohrkappe zerstreut wird und legen sie in gebrauchsfertiges auf Eiskasten).

2. Beziehen Sie sich die auf PCR-Reaktionsprogrammeinstellungen (die Tabelle 4), zum der Temperatur und der Zeit der Reaktion einzustellen.

Anmerkung: Um die Tätigkeit der PCR-Mischung sicherzustellen und seine Verstärkungs-Leistungsfähigkeit zu verbessern, ist es am besten die PCR-Bedingungen auf der PCR-Maschine einzustellen bevor man das PCR-System vorbereitet.

Form 4: Pcr-Reaktionszustandseinstellung

1*: Stellen Sie einen spezifischen Zeitpunkt entsprechend der Länge des verstärkten Zielfragments ein. Die Verstärkungsgeschwindigkeit von Foregene Taq DNA-Polymerase ist 2kb/min.

Anmerkung: Pcr-Reaktionszustände schwanken abhängig von den baulichen Zuständen der Schablone, der Zündkapseln, des etc. Für RNS-Schablonen mit komplexen Sekundärstrukturen, wird es empfohlen, dass die Reaktionstemperatur für den ersten Schritt der Rückübertragung 50°C. ist. In den Einzelgeschäften ist es notwendig, die optimalen Reaktionsbedingungen, einschließlich Vergütungstemperatur, Erweiterungszeit, etc., entsprechend besonderen Bedingungen wie der Größe des Zielfragments zu entwerfen, die Basensequenz des verstärkten Fragments und der GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt und die Länge der Zündkapsel.

RT-PCR Operations-Diagramm