RT-QPCR EasyTM - SYBR-Grün I Cat.No.RT - 02111/02112 eine Schritt-Realzeit Funktelegrafie PCR-Vorlagenmischung mit ROX-Bezugsfärbung

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - SYBR-Grün I Cat.No.RT - 02111/02112 Einrealzeit-RT-PCR Vorlagenmischung mit ROX-Bezugsfärbung

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - SYBR-Grün I

Cat.No.RT - 02111/02112

Einrealzeit-RT-PCR Vorlagenmischung

Für nur Forschungsgebrauch

Speicher an -20℃

Produkteinführung

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - SYBR-Grün Iuses ein einzigartiges System, zum von Funktelegrafie und von Realzeit-PCR-Reaktionen effektiv zu kombinieren, die die quantitative Entdeckung von Genen schnell abschließen können. Das Produkt hat starke Toleranz, hohe Besonderheit und Stabilität. Das Produkt enthält das Foregene HotStar Taq der Firma einzigartige DNA-Polymerase, die die Vorteile der schnelleren Verstärkung (2Kb/min), der hohen Verstärkungs-Leistungsfähigkeit, der starken spezifischen Verstärkungsfähigkeit und der niedrigen Fehlanpassungsrate, die mit gewöhnlichen Taq-Enzymen verglichen wird hat. Es wird hier verwendet, damit Realzeit-RT-PCR unspezifische Verstärkung verringert und die Genauigkeit von PCR verbessert.

Eigenschaften

Einausrüstung macht Rückübertragung und qPCR zwei Reaktionen im gleichen Rohr, müssen nur Schablone RNS, spezifische PCR-Zündkapseln und RNase-freies ddH2O addieren.

Die Ausrüstung kann Viren-RNS oder Spur RNS schnell und leistungsfähig quantitativ analysieren.

Die Ausrüstung benutzt eine einzigartige Foregene-Rückseitenübertragungsreagens und Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, die mit einem einzigartigen Reaktionssystem kombiniert wird, um die Verstärkungs-Leistungsfähigkeit und die Besonderheit der Reaktion effektiv zu verbessern.

Das optimierte Reaktionssystem macht die Reaktion haben höhere Entdeckungsempfindlichkeit, stärkere Wärmebeständigkeit und bessere Toleranz.

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Ausrüstung SYBR-Grüns I kommt mit interner Färbung ROX Bezugs, die benutzt werden kann, um Signalhintergrund und Signalfehler zwischen Brunnen zu beseitigen, der bequem ist, damit Kunden in den verschiedenen Modellen von quantitativen PCR-Instrumenten verwenden.

Kit Contents

Transport und Lagerbedingungen

Zustände 1.Transportation

Der ganze Prozess des niedrigtemperatureiskastentransportes, garantieren, dass die Ausrüstung in einem Zustand von ist <4>

2. Lagerbedingungen

• Die Ausrüstung wird an -20℃ gespeichert. Speichern Sie das Produkt in einem Kühlschrank der konstanten Temperatur an -20℃ sofort nach dem Empfang. Wenn die Lagerbedingungen angebracht sind, vermindert das Produkt keine Leistung während des 1-jährigen Gültigkeitszeitraums.
• 2×RT-qPCR EasyTM Mischungs-SYBRkomponente enthält SYBR-Grün I, halten es bitte weg von Licht.

Ausrüstungsteilinformationen

2× Mischung-SYBR Funktelegrafie-qPCR EasyTM: Foregene-Rückseite Transkriptase, RNase-Hemmnis, Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, optimiertes Verhältnis von dNTPs, SYBR GreenI, Mg2+, Stabilisatoren, Vergrößerer und Optimierer.

ROX-Bezugsfärbung: sie wird im Allgemeinen auf Realzeit-PCR-Verstärkern von Firmen wie ABI und Stratagene verwendet, um die Meinungsverschiedenheit zwischen PCR-Rohren und Rohren beizulegen, die durch PCR-Beispielladefehler verursacht werden. Die Konzentration der ROX-Bezugsfärbung, die durch verschiedene Instrumente erfordert wird, ist unterschiedlich, und der Benutzer kann sie entsprechend der empfohlenen Konzentration des Instrumentes hinzufügen.

Vorkehrungen: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

Die Reagenzien in der Ausrüstung sollten vor Licht geschützt werden und an -20°C. gespeichert werden.

Es wird empfohlen, um die frische Beispielextraktion oder Schablone RNS zu benutzen, die an -80°C gespeichert werden (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, führen Sie bitte das Experiment im RNase-freien Raum durch; die Pipettenspitzen und PCR-Rohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und tragen Sie Wegwerfhandschuhe und Masken.

Diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente benutzt werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

Vor Gebrauch gesetzte 2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR I auf Eis vollständig zur Schmelze, leichter Schlag und Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung zu verbessern und PCR-Verstärkung zu erhöhen die Besonderheit.

2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR enthält SYBR-Grün I, vermeiden bitte grelles Licht.

Schablone RNS-Konzentration

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - SYBR-Grün I: (Gesamt-0.1pg-100ng RNSsystem)/20μl.

Operationsführer

: Vorbereitung von Materialien und von Reagenzien

1. Bereiten Sie die vorbereitete RNS-Schablone (es wird empfohlen, um Foregene-Gesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstungs-Reihenausrüstungen zu benutzen, um RNS zu extrahieren und zu reinigen), spezifische Zündkapseln (10μM) und in Verbindung stehende Verbrauchsmaterialien und Instrumente vor.

Anmerkung: Stellen Sie bitte die Integrität von RNS sicher und versuchen Sie, die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird.

2. Gesetzte 2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR, RNase-freie Färbung des Bezugsddh2o und 50×ROX (gegebenenfalls) auf dem Eis, zum sie natürlich schmelzen und die Rohrwand schlagen zu lassen, um bis Gebrauch zu mischen.

B: Vorbereitung des Systems Funktelegrafie-qPCR

2× Mischung-SYBR Funktelegrafie-qPCR EasyTM ist bequem und schnell zu verwenden und vermeidet Verschmutzung während der Operation und experimenteller Fehler, die in größtem Maße durch mehrfache Vorbereitungen des Reaktionssystems verursacht werden. Bei der Anwendung, nur addieren Hälfte Volumen des Reaktionssystems (zum Beispiel, wenn das Reaktionssystem 20μl ist, Nehmen 10μl 2×RT-qPCR EasyTM Mischungs-SYBRlösung), RNS-Schablone und spezifische Zündkapseln und addieren RNase-freies ddH2O, um das Volumen zu bilden. Siehe Tabelle 1 unten für die spezifische Systemvorbereitung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR

Form 1: Vorbereitung des Systems Funktelegrafie-qPCR

1*: Normalerweise ist die abschließende Konzentration der Zündkapsel 0.2-0.25μM, zum von besseren Ergebnissen zu erhalten. Wenn die Reaktionsleistung arm ist, kann die Zündkapselkonzentration innerhalb des Bereiches 0.1-0.5μM justiert werden.

Anmerkung: Vorwärtszündkapsel und Rückzündkapsel sind spezifische Zündkapseln für das Zielgen.

2*: Wählen Sie die passende abschließende Konzentration der ROX-Bezugsfärbung entsprechend verschiedenen quantitativen PCR-Instrumenten. Die optimale Konzentration der ROX-Bezugsfärbung für allgemeine quantitative PCR-Maschinen wird in der folgenden Tabelle gezeigt:

C: Systemeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR

• Nachdem leicht das System Funktelegrafie-qPCR mit Bezug auf die oben genannte Tabelle, Mischung vorbereitet worden ist (Sie können eine Pipettenspitze zur Pipette leicht verwenden; Sie können auf einem vortexer und einer Zentrifuge, zum der Flüssigkeit zu sammeln, die für die spätere Verwendung auf die Rohrwand oder die Rohrkappe zerstreut wird, und einem Platz auf Eiskasten auch kurz mischen).

2. Beziehen Sie sich die auf Programmeinstellungen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (die Tabelle 2), zum der Temperatur und der Zeit der Reaktion einzustellen.

Anmerkung: Um die Tätigkeit von 2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR sicherzustellen und seine Verstärkungs-Leistungsfähigkeit zu verbessern, ist es am besten das System der Reaktion vorzubereiten Funktelegrafie-qPCR nachdem man das PCR-Instrumentprogramm gegründet hat, damit das Reaktionsprogramm eingeführt werden kann sofort nachdem die Systemvorbereitung abgeschlossen wird.

3. Um den besten qPCR Effekt zu erhalten, kann Steigung PCR verwendet werden um die Reaktionsbedingungen für verschiedene Schablonen und verschiedene Zündkapseln zu optimieren.

Anmerkung: Die ErweiterungsTemperaturspanne Foregene Hotstar Taq DNA-Polymerase stellte in dieser Ausrüstung ist zur Verfügung: 60-72℃ und die beste Erweiterungstemperatur ist 72℃.

Das Folgen ist ein Beispiel von Zuständen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR. Es wird empfohlen, um eine zweistufige Methode für PCR-Reaktion anzuwenden. Wenn die Schablonenkonzentration zu niedrig ist, unspezifische Verstärkung zu verursachen, führt niedriger Zündkapsel TM-Wert zu niedrige Verstärkungs-Leistungsfähigkeit, oder schlechte Verstärkungskurvenwiederholbarkeit, etc., wird es empfohlen, um die dreistufige Methode für PCR-Reaktion zu versuchen. Siehe Tabelle 2-1 (zweistufige Methode) und Tabelle 2-2 (dreistufige Methode) für die Einstellung von Zuständen der Reaktion Funktelegrafie-qPCR.

Form 2-1: Programmeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (zweistufig)

Form 2-2: Programmeinstellung der Reaktion Funktelegrafie-qPCR (dreistufig)

1*: Rückübertragungszeit kann entsprechend experimentellem Bedarf justiert werden. Allgemeine endogene Gene wie Βactin benötigen nur 10 Minuten; um spezifische ausgedrückte Gene zu ermitteln, kann Rückübertragungszeit passend ausgedehnt sein wie gebraucht.

2*: Stellen Sie einen spezifischen Zeitpunkt entsprechend der Länge des verstärkten Zielfragments ein. Die Verstärkungsgeschwindigkeit von Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase ist 2kb/min.

Anmerkung: Pcr-Reaktionszustände schwanken abhängig von den baulichen Zuständen der Schablone, der Zündkapseln, des etc. Für RNS-Schablonen mit komplexen Sekundärstrukturen, wird es empfohlen, um 42℃ für den ersten Schritt der Rückübertragung zu verwenden. Im Einzelgeschäft ist es notwendig, die optimalen Reaktionszustände entsprechend den besonderen Bedingungen wie der Größe des Zielfragments zu entwerfen, die Basensequenz des verstärkten Fragments und der GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt und die Länge der Zündkapsel, einschließlich Vergütungstemperatur, Erweiterungszeit, etc.

Operations-Diagramm

Vorkehrungen: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

- Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

- Die Reagenzien in der Ausrüstung sollten vor Licht geschützt werden und an -20°C. gespeichert werden.

- Es wird empfohlen, um die frische Beispielextraktion oder Schablone RNS zu benutzen, die an -80°C gespeichert werden (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

- Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, führen Sie bitte das Experiment im RNase-freien Raum durch; die Pipettenspitzen und PCR-Rohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und tragen Sie Wegwerfhandschuhe und Masken.

- Diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente benutzt werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

- Vor Gebrauch gesetzte 2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR I auf Eis vollständig zur Schmelze, leichter Schlag und Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung zu verbessern und PCR-Verstärkung zu erhöhen die Besonderheit.

- 2×RT-qPCR EasyTM Mischung-SYBR enthält SYBR-Grün I, vermeiden bitte grelles Licht.