RT-QPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman Cat.No.RT - 02131/02132 Einrealzeit-RT-PCR Vorlagenmischung

Cat.No.RT - 02131/02132

Einrealzeit-RT-PCR Vorlagenmischung

RT-PCR EasyTM I (ein Schritt)

Cat.No.RT - 02011/02012

Ein-RT-PCR Vorlagenmischung

Für nur Forschungsgebrauch

Speicher an -20℃

Produkteinführung

Verwirklichen Ein-RT-PCR EasyTM Reihenprodukte Foregene, dass die integrierte Reaktion von der RNS zu doppelsträngiger DNA d.h. Übertragung aufheben und PCR-Verstärkung im gleichen Reaktionszentrifugenrohr abgeschlossen werden und das gleiche Reaktionssystem, das die experimentellen Schritte vereinfacht, das experimentelle Programm optimiert und die Experiment-Leistungsfähigkeit verbessert.

Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman unter Verwendung Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, das optimierte Taqman-qPCR System kann Realzeitquantitative Entdeckung funktelegraphie-qPCR von Spur RNS-Schablonen schnell und speziell durchführen.

Eigenschaften

- Einausrüstung ermöglicht Rückübertragung und im gleichen Rohr durchgeführt zu werden PCR, muss nur Schablone RNS, spezifische PCR-Zündkapseln und RNase-freies ddH2O addieren.

- Quantitative Realzeitanalyse von Viren-RNS oder von Spur RNS kann schnell und genau durchgeführt werden.

- Die Ausrüstung benutzt eine einzigartige Foregene-Rückseitenübertragungsreagens und Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, die mit einem einzigartigen Reaktionssystem kombiniert wird, um die Verstärkungs-Leistungsfähigkeit und die Besonderheit der Reaktion effektiv zu verbessern.

- Das optimierte Reaktionssystem macht die Reaktion haben höhere Entdeckungsempfindlichkeit, stärkere Wärmebeständigkeit und bessere Toleranz.

- Funktelegrafie-qPCR EasyTM (ein Schritt) - Taqman-Ausrüstung kommt mit interner Färbung ROX Bezugs, die benutzt werden kann, um Signalhintergrund und Signalfehler zwischen Brunnen zu beseitigen, der bequem ist, damit Endbenutzer in den verschiedenen Modellen von quantitativen PCR-Instrumenten verwenden

Die Steuerung der Produktqualität

Entsprechend System umfassenden Qualitätsmanagements FOREGENS (System umfassenden Qualitätsmanagements FOREGENES), werden jede Reihe von RT-PCR EasyTM I (ein Schritt) Ausrüstungen ausschließlich mehrfache Zeiten, die Qualität, die Zuverlässigkeit und die Stabilität jeder Ausrüstungsreihe sicherzustellen geprüft.

Kit Contents

Transport und Lagerbedingungen

Zustände 1.Transportation

Der ganze Prozess des niedrigtemperatureiskastentransportes, garantieren, dass die Ausrüstung in einem Zustand von ist <4>

2. Lagerbedingungen

Funktelegrafie EasyTM werde ich an -20°C. speichere das Produkt in einem Kühlschrank der konstanten Temperatur an -20°C sofort nach dem Empfang gespeichert. Wenn die Lagerbedingungen angebracht sind, vermindert das Produkt keine Leistung während des 1-jährigen Gültigkeitszeitraums.

Ausrüstungsteilinformationen

Mischung 2× RT-PCR EasyTM: Foregene-Rückseite Transkriptase, RNase-Hemmnis, Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase, dNTPs, Mg2+, Reaktionspuffer, Optimierer und Stabilisator, etc.

Vorkehrungen: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

Für Schablonen wird es empfohlen, um die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird oder an -80℃ gespeichert ist (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, sollte die Experimentarbeit im RNase-freien Raum durchgeführt werden; die Pipettenspitzen und DIE PCR-Zentrifugenrohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und Wegwerfhandschuhe und Masken sollten getragen werden. Vor Gebrauch setzen Sie die 2×RT-PCR EasyTM Mischung auf Eis vollständig zur Schmelze, zum leichten Schlag und zur Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung und die Besonderheit von PCR-Verstärkung zu verbessern.

Schablone RNS-Konzentration

RT-PCR EasyTM I (ein Schritt): (Gesamt-0.1pg-1μg RNSsystem)/20μl

Kit Application

- Diese Ausrüstung wird für schnelle Entdeckung der Hochkopie und der Niedrigkopiengene benutzt.

- Es ist für schnelle Entdeckung von RNS-Schablonen mit hoher GASCHROMATOGRAPHIEzufriedener oder komplexer Sekundärstruktur besonders passend.

Die Steuerung der Produktqualität

Entsprechend System umfassenden Qualitätsmanagements FOREGENS (System umfassenden Qualitätsmanagements FOREGENES), werden jede Reihe von RT-PCR EasyTM I (ein Schritt) Ausrüstungen ausschließlich mehrfache Zeiten, die Qualität, die Zuverlässigkeit und die Stabilität jeder Ausrüstungsreihe sicherzustellen geprüft.

Operationsführer

: Vorbereitung von Materialien und von Reagenzien

1. Bereiten Sie die vorbereitete RNS-Schablone (es wird empfohlen, um Foregene-Gesamt-RNS Isolierungs-Ausrüstungs-Reihenausrüstungen zu benutzen, um RNS zu extrahieren und zu reinigen), spezifische Zündkapseln (10μM) und in Verbindung stehende Verbrauchsmaterialien und Instrumente vor.

Anmerkung: Stellen Sie bitte die Integrität von RNS sicher und versuchen Sie, die RNS zu benutzen, die von den frischen Proben extrahiert wird.

2. Mischung des Platz-2× RT-PCR EasyTM und RNase-freie ddH2O auf einem Eisbad, zum es natürlich schmelzen zu lassen und schlagen die Rohrwand, um gut für die spätere Verwendung zu mischen.

B: RT-PCR Systemvorbereitung

2×RT-PCR EasyTM Mischung ist bequem und schnell zu verwenden und vermeidet Verschmutzung während der Operation und experimenteller Fehler, die in größtem Maße durch mehrfache Vorbereitungen des Reaktionssystems verursacht werden. Bei der Anwendung, nur addieren Hälfte Volumen des Reaktionssystems (zum Beispiel, wenn das Reaktionssystem 20μl ist, Nehmen 10μl 2×RT-PCR EasyTM Mischungslösung), passende Menge RNS-Schablone und spezifische Zündkapseln und addieren RNase-freies ddH2O, um das Volumen zu bilden. Siehe Tabelle 1 unten für die spezifische RT-PCR Reaktionssystemvorbereitung.

Form 1: RT-PCR Systemvorbereitung

1*: Normalerweise ist die abschließende Konzentration der Zündkapsel 0.2-0.25μM, zum von besseren Ergebnissen zu erhalten. Wenn die Reaktionsleistung arm ist, kann die Zündkapselkonzentration innerhalb des Bereiches 0.1-0.5μM justiert werden.

Anmerkung: Vorwärtszündkapsel und Rückzündkapsel sind die spezifischen Zündkapseln für das Zielgen; System 50μl, beziehen bitte sich das auf System 20μl, um die Reagensdosierung proportional zu justieren.

C: RT-PCR Reaktions-Programmeinstellung

• Nachdem leicht das RT-PCR System mit Bezug auf die oben genannte Tabelle, Mischung vorbereitet worden ist (Sie können Pipettenspitze verwenden, um leicht durchzubrennen; Sie können auf einem vortexer und einer Zentrifuge, zum der Flüssigkeit zu sammeln, die für die spätere Verwendung auf die Rohrwand oder die Rohrkappe zerstreut wird, und einem Platz auf Eiskasten auch kurz mischen).

2. Beziehen Sie sich die auf RT-PCR Reaktions-Programmeinstellungen (die Tabelle 2), zum der Temperatur und der Zeit der Reaktion einzustellen.

Anmerkung: Nach der Einstellung des PCR-Instrumentprogramms um die Tätigkeit von 2×RT-PCR EasyTM Mischung sicherzustellen und seine Verstärkungs-Leistungsfähigkeit zu verbessern, ist es am besten das RT-PCR Reaktionssystem vorzubereiten, damit das Reaktionsprogramm eingeführt werden kann sofort nachdem das System vorbereitet wird.

Form 2: RT-PCR Reaktionssystemeinstellung

Anmerkung: Das oben genannte Verfahren ist als nur Referenz. Die tatsächlichen Reaktionszustände schwanken abhängig von den baulichen Zuständen der Schablone, der Zündkapseln, des etc. Für RNS-Schablonen mit komplexen Sekundärstrukturen, wird die Reaktionstemperatur für den ersten Schritt der Rückübertragung empfohlen, um 50°C. zu sein. Im Einzelgeschäft ist es notwendig, die optimalen Reaktionsbedingungen, einschließlich Vergütungstemperatur, Erweiterungszeit, etc. entsprechend den besonderen Bedingungen der Zielfragmentgröße zu entwerfen, die Basensequenz des verstärkten Fragments und der GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt und die Länge der Zündkapsel.
RT-PCR Operations-Diagramm

Foregene-Rückseite Transkriptase

Foregene-Rückseite Transkriptase kann in hohem Grade leistungsfähige und spezifische Rückübertragungsreaktion zur Verfügung stellen. Rück-Transkriptase weist hohe Affinität auf und behält noch gute Rückübertragungstätigkeit bei einer Reaktionstemperatur von 50°C. bei. Es kann gut aufheben überträgt RNS mit komplexer Sekundärstruktur, die andere Rücktranskriptasen nicht behandeln können. Foregene-Rückseite Transkriptase hat hohe Empfindlichkeit und ist in einer breiten Palette von RNS-Mengen (0.1pg≤RNA≤1μg) anwendbar.

Foregene HotStar Taq DNA-Polymerase

Stellt eine in hohem Grade spezifische Verstärkung von PCR zur Verfügung. Wenn Rückübertragung im Gang ist, ist DNA-Polymerase vollständig unwirksam und hindert nicht die Rückübertragungsreaktion. Nach dem PCR-Reaktionsprogramm erhitzt zu 94°C, ist die DNA-Polymerase aktiviert und die Rückseite Transkriptase wird inaktiviert. Der Heißanfangprozeß beseitigt die Bildung von unspezifischen Vergütungszündkapseln und von Zündkapseldimern im ersten Zyklus und stellt hohe Besonderheit und Zuverlässigkeit von PCR-Verstärkung sicher.

Vorsicht: (Lesen Sie bitte die Vorkehrungen sorgfältig vor der Anwendung der Ausrüstung)

- Reagenzien sollten das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden, andernfalls verringert sich die Leistung der Reagenzien oder wird ungültig.

- Es wird empfohlen, um die frische Beispielextraktion oder Schablone RNS zu benutzen, die an -80℃ gespeichert werden (RNS sollte das wiederholte Einfrieren und das Auftauen vermeiden).

- Um RNaseverschmutzung zu vermeiden, sollte die Experimentoperation im RNase-freien Raum durchgeführt werden; die Pipettenspitzen und PCR-Rohre, die benutzt werden, müssen RNase-frei sein; und Wegwerfhandschuhe und Masken sollten getragen werden.

- Diese Ausrüstung muss mit spezifischen Zündkapseln für Experimente benutzt werden. Wählen Sie bitte die spezifischen Zündkapseln vor, damit das Gen entsprechend dem Bedarf des Experimentes verstärkt werden kann.

- Vor Gebrauch setzen Sie Mischung 2× RT-PCR EasyTM auf Eis vollständig zur Schmelze, zum leichten Schlag und zur Mischung lange vor Gebrauch; die Vorbereitung des Systems sollte auf einem Eisbad bearbeitet werden, um die Leistung der Ausrüstung und die Besonderheit von PCR-Verstärkung zu verbessern.

- Eisbad

Selbst-vorbereitete Reagenzien

- RNS-Schablone

- Gen spezifische PCR-Zündkapseln

Sicherheit

       - Dieses Produkt ist für nur Gebrauch der wissenschaftlichen Forschung, bitte verwendet ihn nicht in der Medizin, in der klinischen Medizin, in der Nahrung und in den Kosmetik.

       - Passende Kleidung der Abnutzung Labor, Handschuhe, Schutzgläser, etc., wenn Chemikalien verwendet werden.

Die negative Steuerung hat zu hohen Fluoreszenzwert

1. Reagensverschmutzung verursacht während der Operation.

Empfehlung: Ersetzen Sie durch neue Reagenzien für RT-PCR Experimente.

2. Verschmutzung trat während der Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems auf. Empfehlung: Nehmen Sie notwendige Schutzmaßnahmen während der Operation, wie: tragende Latexhandschuhe, unter Verwendung einer Pipettenspitze mit einem Filter, einem etc.

3. Die Zündkapseln werden vermindert und die Verminderung der Zündkapseln führt zu unspezifische Verstärkung.

Vorschlag: Verwenden Sie SDS-PAGE Elektrophorese, um zu ermitteln, ob die Zündkapseln vermindert werden, und ersetzen Sie sie durch neue Zündkapseln für RT-PCR Experimente.

Schlechte Wiederholbarkeit von quantitativen Werten

1. Das Instrument versagt.

Vorschlag: Es gibt möglicherweise Fehler zwischen jedem PCR-Loch der PCR-Maschine, mit dem Ergebnis der schlechten Reproduzierbarkeit während des Temperaturmanagements oder -entdeckung.

Führen Sie bitte den Test entsprechend den Anweisungen des entsprechenden Instrumentes durch.

2. Die Beispielreinheit ist- nicht gut.

Empfehlung: Unreine Proben führen zu schlechte Reproduzierbarkeit des Experimentes, das die Reinheit der Schablone und der Zündkapseln umfasst. Es ist am besten, die Schablone repurify, und die Zündkapseln werden gut durch SDS-PAGE gereinigt.

3. Die PCR-Systemvorbereitungs- und -lagerzeit ist zu lang.

Vorschlag: Benutzen Sie das RT-PCR System für PCR-Experimente sofort nach Vorbereitung, und lassen Sie es nicht zu lange; es wird empfohlen, um das PCR-Programm vor Verfahren mit der RT-PCR Systemvorbereitung zu gründen.

4. Die PCR-Verstärkungszustände sind nicht passend, und die Zündkapselreihenfolge oder -konzentration ist unsachgemäß.

Vorschlag: bestätigen Sie die Korrektheit der Zündkapselreihenfolge und die Zündkapsel ist nicht vermindert worden; wenn das Verstärkungssignal nicht gut ist, versuchen Sie, die Vergütungstemperatur zu justieren und die Zündkapselkonzentration passend zu justieren.